Avaliação da imunogenicidade e eficácia protetora da proteína recombinante Lack de Leishmania amazonensis na leishmaniose experimental murina / Evaluation of immunogenicity and protective efficacy of recombinant Lack of Leishmania amazonensis in murine experimental leishmaniasis

Considera-se que uma vacina poderia representar a estratégia mais abrangente para o controle da leishmaniose. Neste trabalho, avaliamos no modelo murino a imunogenicidade e eficácia protetora da proteína recombinante LACK (Leishmania analogue of the receptor for activated C kinase) de Leishmania amazonensis, um antígeno candidato a vacina. Para o estabelecimento do modelo, acompanhamos a progressão das lesões induzidas por (L.) amazonensis em três diferentes linhagens isogênicas de camundongo, utilizando doses de inoculo. Neste estudo preliminar, foi selecionada a linhagem C57BL/6, por sua susceptibilidade moderada, e o inoculo de 105 promastigotas de fase estacionária. Grupos de camundongos C57BL/6 foram imunizados por vias subcutânea (SC) no coxim plantar posterior com LACK ou LACK associado ao adjuvante CpG-ODN. Os grupos controles foram inoculados com CpG-ODN ou PBS. Duas semanas depois, os animais receberam uma dose de reforço igual à primeira e, após quatro semanas, foram desafiados por via SC com (L.) amazonensis. Os resultados do presente estudo mostraram que a proteína LACK de (L.) amazonensis é imunogênica, sendo capaz de induzir resposta imune humoral e celulares. A imunização com LACK também induziu uma proteção significativa contra a infecção, verificada pelos três parâmetros de proteção adotados: diâmetro das lesões, carga parasitária e ulcerações das lesões. As propriedades de imunogenicidade e eficácia protetora foram obtidas com a inoculação da proteína recombinante LACK isoladamente, porém ambas foram expressivamente aumentadas com a utilização do adjuvante CpG-ODN. A resposta imune humoral anti-LACK encontrada nos camundongos imunizados com LACK teve um perfil TH1, com produção de anticorpos do isotipo IgG2a e ausência de níveis expressivos de anticorpos IgG1. do ponto de vista da imunidade celular, a resposta de citocinas, estimulada tanto pelo antígeno LACK quanto pelo extrato total de promastigotas mortas de L. amazonensis, se caracterizou por um perfil misto, com produção de IFN-gama e IL-10. Após a infecção, este perfil misto encontrado nos camundongos imunizados contrastou com o perfil observado nos grupos controle, que apresentaram uma produção de IL-10 semelhante à encontrada nos grupos imunizados, mas ausência de IFN-gama. Os resultados obtidos neste trabalho mostraram o efeito imunoprotetor da proteína LACK no modelo de infecção por (L.) amazonensis em camundongos C57BL/6 e abrem perspectivas para o desenvolvimento de vacinas contra a leishmaniose em seres humanos.

Lymphocyte subset analyses in healthy adults vaccinated with yellow fever 17DD virus

In this study the kinetics of humoral and cellular immune responses in first-time vaccinees and re-vaccinees with the yellow fever 17DD vaccine virus was analyzed. Flow cytometric analyses were used to determine percentual values of T and B cells in parallel to the yellow fever neutralizing antibody production. All lymphocyte subsets analyzed were augmented around the 30th post vaccination day, both for first-time vaccinees and re-vaccinees. CD3+ T cells increased from 30.8 percent (SE ± 4 percent) to 61.15 percent (SE ± 4.2 percent), CD4+ T cells from 22.4 percent (SE ± 3.6 percent) to 39.17 percent (SE ± 2 percent) with 43 percent of these cells corresponding to CD4+CD45RO+ T cells, CD8+ T cells from 15.2 percent (SE ± 2.9 percent) to 27 percent (SE ± 3 percent) with 70 percent corresponding to CD8+CD45RO+ T cells in first-time vaccinees. In re-vaccinees, the CD3+ T cells increased from 50.7 percent (SE ± 3 percent) to 80 percent (SE ± 2.3 percent), CD4+ T cells from 24.9 percent (SE ± 1.4 percent) to 40 percent (SE ± 3 percent) presenting a percentage of 95 percent CD4+CD45RO+ T cells, CD8+ T cells from 19.7 percent (SE ± 1.8 percent) to 25 percent (SE ± 2 percent). Among CD8+CD38+ T cells there could be observed an increase from 15 to 41.6 percent in first-time vaccinees and 20.7 to 62.6 percent in re-vaccinees. Regarding neutralizing antibodies, the re-vaccinees presented high titers even before re-vaccination. The levels of neutralizing antibodies of first-time vaccinees were similar to those presented by re-vaccinees at day 30 after vaccination, indicating the success of primary vaccination. Our data provide a basis for further studies on immunological behavior of the YF 17DD vaccine.